Change search
ReferencesLink to record
Permanent link

Direct link
Karakterisering av gener som påvirker biosyntesen av alginat i Pseudomonas fluorescens
Norwegian University of Science and Technology, Faculty of Natural Sciences and Technology, Department of Biotechnology.
2011 (Norwegian)MasteroppgaveStudent thesisAlternative title
Characterization of genes that influence the biosynthesis of alginate in Pseudomonas fluorescens (English)
Abstract [no]
Pseudomonas fluorescens har evne til å produsere store store mengder alginat. Tidligere er det laget en stamme, P. fluorescens SBW25 MS1 ΔalgC::TnKb61, hvor algD-operonet og algC er satt under kontroll av Pm-promotor. Dette gjør at den produserer alginat ved tilsats av m-toluensyre. Denne stammmen har blitt mutert med transposon og effekten på alginatproduksjonen har blitt undersøkt. Ved transposonmutagenese ble det funnet 180 mutanter med endret alginatproduksjon, og insersjonspunktet for transposonet ble identifisert. I to av disse mutantene var henholdsvis genene clpA og PFLU3927 inaktivert. clpA er en Clp-protease, mens PFLU3927 er en protease som tilhører lon-proteasefamilien. I denne oppgaven skulle disse genenes rolle i biosyntesen av alginat verifiseres. For å gjøre dette ble mutantene komplementert ved å sette inn villtypevarianten av genet inn i mutanten. Innføringen av genet ble gjort ved bruk av transposon. Siden algD-operonet var satt under kontroll av Pm-promotoren i stammen som ble benyttet, skal denne stammen være uavhengig av sigmafaktoren AlgU, som normalt er nødvendig for ekspresjon av algD-operonet. For å teste om stammen virkelig var uavhengig av AlgU, ble det laget en mutant hvor AlgU ble inaktivert. Dette ble gjort ved å fjerne en del i algU ved bruk av PCR. Videre ble villtypegenet erstattet med delesjonsgenet i P. fluorescens. Dette ble gjort ved bruk av homolog rekombinering. For å se hvilken effekt genene hadde på alginatproduksjonen, ble det målt alginatproduksjon i transposonmutantene og i de komplementerte stammene som ble laget i dette arbeidet. Alginatmålingene gikk ikke som ventet, da det ikke kunne registreres alginat i de positive kontrollene. Det var kun to stammer hvor det ble registrert alginatproduksjon, 30O1 clpA og 30O1 clpA::TnES4. Dette forsøket ble utført gjentatte ganger, men med samme resultat. Det er foreslått at forskjellen i alginatproduksjon mellom mediene PIM og DEF3 i tidligere forsøk på clpA kan komme av forskjeller i fosfatmengde og/eller peptonmengde i mediene. Det er også foreslått at PFLU3927 kan være et varmesjokkprotein og at proteinaktiviteten kan økes av ulike former for stress, og videre at dette kan føre til at alginatproduksjonen endres som følge av det.
Place, publisher, year, edition, pages
Institutt for bioteknologi , 2011. , 91 p.
Keyword [no]
ntnudaim:6612, MBIOT5 Bioteknologi, Biokatalyse/Biopolymerkjemi
Identifiers
URN: urn:nbn:no:ntnu:diva-12753Local ID: ntnudaim:6612OAI: oai:DiVA.org:ntnu-12753DiVA: diva2:423816
Supervisors
Available from: 2011-06-16 Created: 2011-06-16

Open Access in DiVA

fulltext(2181 kB)289 downloads
File information
File name FULLTEXT01.pdfFile size 2181 kBChecksum SHA-512
f6079cc3d4c25cd5d3b3b1f3420296c4e82eee2f7234f9ad0d3bd0bcfddb6e9eb339804b4c32aab18c6358eeb642e21a315fe640d58eca862509696d5de81f95
Type fulltextMimetype application/pdf
cover(50 kB)18 downloads
File information
File name COVER01.pdfFile size 50 kBChecksum SHA-512
a23349f14a5b0ee63f1cd97a9ee54a5626dbe3e8cd12c77d21b4bafb692b9f54754c212722be992c9018b571a3a9c0c2534dc1e40b90e2d0c6c027819c81e058
Type coverMimetype application/pdf

By organisation
Department of Biotechnology

Search outside of DiVA

GoogleGoogle Scholar
Total: 289 downloads
The number of downloads is the sum of all downloads of full texts. It may include eg previous versions that are now no longer available

Total: 78 hits
ReferencesLink to record
Permanent link

Direct link